嗜肺军团菌致病性与效应蛋白的研究进展

嗜肺军团菌是一种可以引起军团菌肺炎和庞蒂亚克热的兼性胞内病原菌，主要侵染阿米巴原虫和人类巨噬细胞。该菌在宿主胞内能依靠Dot/Icm IVB型分泌系统产生的效应蛋白成功逃避溶酶体的降解。本文主要对嗜肺军团菌的致病物质、胞内存活与增殖机制及其效应蛋白的生物学功能进行综述，详细介绍嗜肺军团菌的毒力因子与致病机制，为军团病防治的研究提供新思路，也为其他胞内病原菌所致感染性疾病的研究提供重要的借鉴意义。     

幽门螺杆菌Tipα通过Wnt/β-catenin通路诱导胃癌细胞EMT

探讨幽门螺杆菌(H.pylori)肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)是否通过Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞上皮-间质转化(EMT)。设置PBS组、Tipα组和通路抑制剂XAV939预处理组,采用Western blot和免疫荧光观察β-catenin磷酸化和核转位情况;qRT-PCR和Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及通路下游靶基因(c-myc和cyclinD1)的表达情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果显示,Tipα能以时间依赖性方式诱导β-catenin Ser675和Ser552磷酸化和核转位,且下调E-cadherin和ZO-1表达,上调N-cadherin和Vimentin表达(P＜0.01);与PBS相比,Tipα增强c-myc和cyclinD1的表达(P＜0.05)以及细胞的迁移能力(P＜0.05)。XAV939预处理抑制Tipα诱导的SGC7901细胞EMT形成及通路下游靶基因的表达。表明Wnt/β-catenin信号通路参与了Tipα诱导的胃癌细胞EMT形成。     

EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测

为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。     

人乳头瘤病毒16型E5蛋白真核载体的构建及表达

目的构建人乳头瘤病毒115型（HPV16）E5蛋白真核表达载体pcDNA3．1（＋）／HPV16E5,分析E5在HeLa细胞及BALB／c小鼠肌肉组织中的表达。方法设计HPV16E5基因引物,PCR扩增E5基因。经Bam-HI、EcoR1酶切后将其连接入pcDNA3．1（＋）,PCR及双酶切筛选阳性克隆并测序。将构建的pcDNA3．1（＋）／HPV16E5转染HeLa细胞,利用RT—PCR测定HPV16E5mRNA表达。将6只BALB／c小鼠分为3组,分别取100mgpcDNA3．1（＋）／HPV16E5、100mgpcDNA3．1（＋）、100mLPBS经肌肉注射小鼠,2周1次,共4次;末次接种后第14天取小鼠股四头肌制成石蜡切片,免疫组织化学法检测E5蛋白在小鼠肌肉组织中的表达。结果PCR扩增得到252bpHPV16E5基因片段,DNA测序结果显示E5基因片段正确地连入pcDNA3．1（＋）。构建的pcDNA3．1（＋）／HPV16E5在HeLa细胞表达大小为252bp的HPV16E5mRNA。小鼠股四头肌细胞膜被染成棕黄色。结论构建的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／HPV16E5能在HeLa细胞及小鼠肌肉组织中表达HPV16E5蛋白。     

螺旋体脂蛋白免疫调节机制研究进展

梅毒、莱姆病和细螺旋体病是威胁人类健康的主要螺旋体病。然而,对此类疾病的免疫机制尚未充分阐明。螺旋体通过各种结构,例如脂多糖(LPS)、表面脂蛋白和糖脂与宿主相互作用。尽管螺旋体抗原如LPS和糖脂可能在其感染时有助于炎症反应,但梅毒螺旋体(Tp)和伯氏疏螺旋体(Bb)缺乏LPS。脂蛋白是表达于所有螺旋体的最丰富的蛋白,往往决定螺旋体与环境作用的方式。脂蛋白可促进炎症反应、调节固有免疫应答和适应性免疫应答,并有助于螺旋体粘附在宿主中或中肠上,或逃避免疫系统。然而,大多数螺旋体脂蛋白功能尚未明确。本文综述螺旋体脂蛋白在免疫逃逸和免疫激活方面的免疫调节作用,将有助于阐明螺旋体病的固有免疫致病机制,以及与螺旋体疾病疫苗发展和螺旋体病炎症反应有关的适应性免疫机制。     

肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究进展

肺炎嗜衣原体（Cpn）是二十世纪八十年代新发现的一种重要的呼吸系统感染的病原体，它不仅可以引起非典型肺炎，而且还有可能通过直接或间接的机制参与动脉粥样硬化的发生与发展，因而受到了人们越来越多的关注。近年来，Cpn感染的血清学诊断也成为人们关注的焦点之一，目前常用于诊断Cpn感染的抗原有全菌抗原、脂多糖和主要外膜蛋白等属特异性抗原。因此本文就Cpn感染诊断候选抗原的研究进展作一综述。     

SiO2-Pickering乳液佐剂增强沙眼衣原体Pgp3蛋白免疫效果

目的优化二氧化硅(SiO₂)Pickering(SPE)乳液佐剂,研究其对沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的免疫增强效应,为预防Ct感染性疾病提供实验依据。 方法优化SiO₂质量浓度、水油比及超声功率,超声乳化制备SPE佐剂。30只小鼠均分为SPE+Pgp3组(Pgp3蛋白和SPE混合免疫)、Pgp3组(Pgp3蛋白单独免疫)和PBS组。ELISA检测各组小鼠血清抗体水平和脾细胞上清细胞因子水平,流式细胞术检测脾细胞γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。 结果SPE最优制备条件为超声功率337 W、水油比10∶2、SiO₂质量浓度1 g/L,最优条件下SPE直径为(300.12±44.26) nm,聚合物分散性指数为0.33±0.12。除PBS组外,其他组均检测到了特异性抗体,SPE+Pgp3组总抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a抗体水平高于Pgp3组,且以IgG2a升高为主(P＜0.05)。SPE+Pgp3组、Pgp3组脾细胞IFN-γ和刺激指数高于PBS组,且SPE+Pgp3组高于Pgp3组(P＜0.05)；IFN-γ主要由CD4＋T细胞和CD8＋T细胞分泌。各组IL-4含量均较低。 结论SPE乳液佐剂具有良好的佐剂效应,能有效增强Pgp3蛋白体液免疫和细胞免疫,且可优势诱导Th1型免疫反应。     

pEGFP/MOMP真核表达重组体的构建及表达

目的：克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因，构建pEGFP／MOMP真核表达重组质粒，为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据．方法：用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段，克隆人真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中，阳性重组子经BanH I、Kpn I双酶切、PCR扩增及测序鉴定；并经脂质体介导转染HeLa细胞，36h后观察瞬时表达情况。结果：PCR扩增得到约1．2kb的特异性MOMP基因片段；序列测定证实与GenBank卺录的D型沙眼衣原体一致；筛选鉴定出真核表达重组体pEGFP／MOMP。结论：成功地构建了pEGFP／MOMP真核表达重组体，并在HeLa细胞中表达了MOMP。     

Apelin/APJ系统在心血管疾病中的生理与病理作用

Apelin/APJ系统在人体组织中分布广泛,通过自分泌和旁分泌等信号途径发挥重要的生物学效应。它具有调节血管舒缩功能、正性肌力作用、调节血管内皮功能、刺激VSMC表型转换和增殖功能、促进血管发生、调节体液平衡等重要生物学功能,参与动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭、心肌梗塞、心房纤颤等多种心血管系统疾病的发生发展。本文对Apelin/APJ系统在心血管疾病中的生理、病理作用进行了综述。     

pcDNA3.1/ SjDLC 和pcDNA3.1/mIFN-γ重组质粒构建及表达

目的 构建日本血吸虫动力蛋白轻链DNA疫苗和小鼠干扰素真核表达质粒,研究其在HeLa细胞及动物体内的表达。方法设计特异性引物,PCR扩增获取动力蛋白轻链(SjDLC)与干扰素-γ(IFN-γ)基因,克隆于pcDNA3.1真核质粒,经双酶切及测序鉴定。将两种重组质粒分别转染至HeLa细胞,Western blot鉴定其表达。真核质粒经左腿股四头肌免疫小鼠,在末次免疫2周后,PCR法检测小鼠肌组织内SjDLC和IFN-γ基因,免疫组织化学法检测基因的表达,MTT法检测T细胞增殖水平。结果PCR和双酶切能检测到280 bp的SjDLC基因及480 bp的IFN-γ基因;Western blot显示在12 kDa和19 kDa处有阳性反应条带,与SjDLC和IFN-γ分子量大小一致,两种基因能在HeLa细胞中表达。PCR及免疫组化显示两种基因能在小鼠肌肉组织中存在和表达。MTT法显示两种质粒均能刺激T细胞增殖。结论成功构建pcDNA3.1/SjDLC和pcDNA 3.1/ mIFN-γ真核质粒,两种质粒能在HeLa细胞和动物体内表达。